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niz125
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zouiten
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 Posted: Sun 27 Apr 2008 - 18:47 Post subject: aide biomol |
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slt les ami(es)  ,
 j'ai un problème, j'arrive pas a comprendre la méthode de l'invalidation conditionnelle du gène par la technique CRE/LOXP (dernier chapitre de transgenése) svp aidez moi 
merci d'avance!!!!!!!
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l'esprit est comme un parachute il ne fonctionne que grand ouvert!!!!!!!!!!
Last edited by zouiten on Mon 28 Apr 2008 - 12:26; edited 1 time in total
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Rim
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| Posted: Sun 27 Apr 2008 - 20:13 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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| Quote: | slt les ami(es) ,
j'ai un problème, j'arrive pas a comprendre la méthode de l'invalidation conditionnelle du gène par la technique CRE/LOXP (dernier chapitre de transgenése) svp aidez moi
merci d'avance!!!!!!! |
Salut Zouiten
Bon j'essaierais de t'expliquer ce que j'ai pu discerner après tant de recherche.Excuse moi si j'arrive pas à bien transmettre le message.
Bon, tt d'abord ,je voudrais mettre l'accent sur le fait que l'invalidation conditionnelle cherche à invalider un gène au sein d'un tissu spécifique plutôt que ds ts les tissus comme ds le cas de l'invalidation complète.
En effet , pour pouvoir invalider le gène ds un tissu spécifique ,on doit disposer des mécanismes capables de restreindre l'invalidation à ce tissu.Ce mécanisme est bien le système CRE/LoxP.En fait, on insère aux 2 extrémités d'un exon du gène que l'on veut invalider deux fragments LoxP (ce sont des fragments d'ADN de 34 pb).Ces 2 fragments sont reconnus par l'enzyme CRE qui est une recombinase que l'on fait exprimer ds ce gène en jouant sur le promoteur.Cette recombinase va reconnaître en effet les 2 sites LOXP ,les couper ac bien sur l'exon dedans et ainsi recombiner ou lier les 2 extrémités qui restent libres;ainsi on aurait supprimé l'exon et par conséquent invalidé le gène ds ce tissu spécifique.
Tu vas certainement te dire à quoi bon invalider un gène d'une façon conditionnelle alors que l'on aurait pu le faire d'une façon complète ,et la je te dirais que l'invalidation complète peut entraîner une mortalité embryonnaire et rendre tte analyse finale impossible. De plus, la disruption d’un gène donné dans tout l’organisme peut aboutir à un phénotype complexe, difficilement interprétable. Et Supposons, par exemple, que des chercheurs souhaitent étudier la délétion du gène de la DNA ß Polymerase chez les lymphocytes T. Le gène doit cependant pouvoir s’exprimer correctement au cours du développement embryonnaire et dans les autres cellules, tandis qu’il sera spécifiquement disrupté chez les lymphocytes T.
j'espère que tu m'as comprise!
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kaoutar80
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| Posted: Mon 28 Apr 2008 - 21:17 Post subject: QUESTION/REPONSE (Biomol) |
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svp qq peut m'aider ss blokée là
j'arrive po à comprendre le lien entre les profils electrophoretiques et les mutations
aidezzzzzzzzzz moi!!! 
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Rim
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| Posted: Mon 28 Apr 2008 - 23:36 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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Slt Kaoutar
Ta question est très vague ,et on peut pas t'expliquer ça ds l'air!!!!!!il faut que tu ns apportes un exemple que t'as oas compris pour qu'on te l'explique !!!!!!!les profils éléctrophorétiques diffèrent d'une situation à une autre ,c pour cela qu'il est nécéssaire de travailler sur des exemples !!comme ça tu pourras mieux comprendre!!
Merci
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kaoutar80
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 00:15 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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merci bccccccccccp mejbar pr ton initiative
ds le polycopie de bio mol (po le livret) page 17 en bas de la page
je pense ke si j'arrive à comprendre cet exemple ça va y aller
merci d'avance
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Rim
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 01:03 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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Bon je vais faire de mon mieux pour que tu comprennes!!
Premièrement ,je voudrais signaler que cette méthode qui s'appelle la Southern blot,a pour but de détécter des mutations au niveau de l'ADN.En effet ,la méthode qui permet de savoir si une mutation est survenue est l'ultilisation des enzymes de restriction.Comme tu peux le deviner,ces enzymes qui reconnaissent des endroits bien spécifiques de L' ADN ne vont plus pouvoir reconnaître leurs sites en cas de mutation .
Je m'explique, (je traite l'exemple à droite),si tu vois bien ce fragment,tu trouveras dfférentes valeurs en haut de chaque accolade,ces valeurs représentent la taille de ce fragment.Les flèches que tu vois marquent les sites de reconnaissance des enzymes de restriction.Ainsi,en amplifiant l'ADN(ça veut dire en augmentant le nombre de ce fragment),et en utilisant les enzymes de restriction on va pouvoir couper ces fragments;2kb 4kb 1kb 5kb,
En cas d'ADN normal,où ts les sites de restriction sont présents,l'électrocardiogramme va détecter ts les fragments,  ehh oui je sais la question que tu te poses mnt ma chère!! Prq on détécte un seul fragment pour le 1 KB et le 2KB alors que pour les autres on en détécte 2?? et lors si tu vois bien ce qui est écrit en bas de la séquence tu trouveras 3hybridation ac 2 sondes ADNc et fragment génomique,et c la colonne à droite qui concerne l'hybridation ac l'ADN c et la gche le fragment génomique!! l'ADN génomique reconnait ts les fragments ac lequels elle va s'hybrider sauf celui de 2kb car la sonde génomique (située en bas de la séquence)ne comporte pas de nucléotides complémentaires à ce fragment!!.L'ADN c quant à elle,elle va reconnaitre que les séquences ou il y a les exons et donc le fragment de 1kb qui est un intron ne sera pas détécté .l'électrocardiogramme ne détécte aucun fragment e 3kb car comme tu l'as déjà remarqué il n'existe aucun fragment de cette taille ds la séquence à étudier!!
En cas de malade homozygote ,qui a subi la délétion de l'exon 5',tu peux bien imaginer pourquoi on ne détécte pas de fragment de 2kb !!!
En cas d'hétérozygote,un allèle a subi la délétion et l'autre est resté sain.ce qui explique la bande claire qu'on obtient ds le fragment de 2kb,en fait je voudrais te rappeler que ds les autres cas où les gens étaient homozygote ,on obtenait une bande sombre qui n'était qu'une superposition de 2 bandes dues aux 2 copies identiques coupées par l'enzyme de restriction!!!!!!!
Bon je pense que j'ai tt dit.Je te jure que j'ai fait tt mon mieux pour que tu assimiles et j'espère que c le cas!!!
Last edited by Rim on Thu 1 May 2008 - 16:37; edited 1 time in total
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Rim
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 07:14 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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Je voudrais me corriger!! je parlais tt le tps de l'électrocardiogramme alors que ça concerne la biophysique!!mais t'inquiète pas le reste est juste!!au lieu de l'éléctrocardiogramme tu vas lire après autoradiographie!!merci
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kaoutar80
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 14:41 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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vraiment je sé po koi te dire mejbar mé t hyyyyyyyyyyyyyyyyyper gentille
je te remercie infiniment ma chere c trop gentil 2 ta part
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niz125
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kaoutar80
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 14:50 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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j'ai encore 1 kestion
ds le 2e cas pk on a detecte 2 fragments de 2kb
veuillez m'excuser 
je te dis mlle mejbar ke j tres b1 saisi le 1er exemple merci infiniment
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dr_lahlou
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 14:52 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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Merci bcq Mll mejbar c'est magnifique de ta part
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Quand la médecine manque de clarté, il faut surveiller les médecins. ,,
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Rim
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 16:10 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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De rien chers amis c vous qui êtes trop gentils!!!
| kaoutar80 wrote: | j'ai encore 1 kestion ds le 2e cas pk on a detecte 2 fragments de 2kb
veuillez m'excuser
je te dis mlle mejbar ke j tres b1 saisi le 1er exemple merci infiniment
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Dsl Kaoutar mais j'ai pas pu savoir de quoi tu parles exactement,pourrais tu t'expliquer encore??
merci
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kaoutar80
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 19:06 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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 je parle 2e exemple ou on a la deletion de l'exon 3
j po compris pk on a mis 2 barres 2kb en cas de mutation homozygote e heterozygote
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Rim
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 19:12 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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 je pense que tu t'es trompée d'exemple !!!!je t'ai dit que je traite l'exemple à droite de la page pas à ta droite!!dsl je devais m'expliquer plus!!!de tte façon ça me fait plaisir que t'aie trouvé des contradictions ac l'autre exemple!!ça me rassure que t'as bien compris!!merci bcp
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kaoutar80
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 19:26 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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oui j bien saisi le 1er ex et meme le 2e j'arrive à comprendre un ptt peu à part ce bleme de 2kb
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Rim
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 19:38 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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| kaoutar80 wrote: | oui j bien saisi le 1er ex et meme le 2e j'arrive à comprendre un ptt peu à part ce bleme de 2kb
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Bon comme tu sais bien ,la délétion qui attaque l'extrémité 5' ds le 2e cas,aura pour effet soit la disparition de tt le fragment de 2kb ou de qq nucléotides de ce fragment,ainsi ,l'ADNc (qui reconnait l'exon entier et ac lequel elle ne pourra s'hybrider que si les séquences précédant l'exon sont tt à fait complémentaires ac ses propres séquences),ne va plus pouvoir s'hybrider puisqu'il y a des nucléotides qui manquent et comme cela ce fragment de 2kb ne sera pas détécté!!! alors tu y vois plus clair mnt???
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kaoutar80
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| Posted: Tue 29 Apr 2008 - 23:36 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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merci bccccccccccccccccccccccp mejbar wlah c trop gentil
mé je pense ke t'as b1 compris ma derniere kestion je parle du 2e exemple ou il y a deletion de l'exon 3
je t'en ss vraiment reconnaissante pr les efforts que t'as fourni pr m'expliquer
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Rim
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 00:25 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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| kaoutar80 wrote: | merci bccccccccccccccccccccccp mejbar wlah c trop gentil mé je pense ke t'as b1 compris ma derniere kestion je parle du 2e exemple ou il y a deletion de l'exon 3
je t'en ss vraiment reconnaissante pr les efforts que t'as fourni pr m'expliquer
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de rien ma chère !! t'es tjs la bienvenue!!
Bon enfin je pense que je t'ai comprise (had l medecine tatkllkh ) .Tu vois bien que l'exon 3 fait partie du fragment de 4kb ,et tu vois bien que ce mêmme fragment contient l'exon 2 ça veut dire que si l'exon 3 est délété ,il restera encore l'exon 2 sain et qui demeurera reconnu par l'ADNc et c'est cet exon qui représente la bande au dessous de celle de 2kb!!Ainsi ds le cas de l'homozygote pr la délétion,il n'y aura pas de fragment de 4kb puisque les 2allèles seront affectés et l'on verra l'apparition de 2 bandes sombres,alors que ds le cas de l'hétérozygote,on détéctera 2 bandes claires de 4 kb qui correspondent à l'allèle sain,et une bande claire de moins de 2kb qui correspond à l'allèle affecté par la délétion!!
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sérano-solbarane
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 09:13 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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merci à mademoiselle Mejbar pour ces clarifications et cette remarquable explication ; j' éspère vraiment que tu sera bien récompensé à l' examen pour cette maitrise du cours et pour ton aide à nous
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signé
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sérano-solbarane
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Joined: 26 Apr 2008
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 09:41 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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j'ai une question à vous poser Mlle Mejbar :
pourquoi n' avons-nous pas détecté dans les 2 cas hétérozygote et homozygote pour
la déletion le l' exon 3 , avec hybridation avec fragment génomique --donc dans les 2 colonnes à droite-- une bande sombre de 2Kb pour l' homozygote et une bande claire de 2Kb pour l' héterozygote tous les 2 correspondant à la partie réstante du fragment de 4Kb déleté partiellement ???? MERCI
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signé
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Rim
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 10:51 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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| sérano-solbarane wrote: | j'ai une question à vous poser Mlle Mejbar : pourquoi n' avons-nous pas détecté dans les 2 cas hétérozygote et homozygote pourla déletion le l' exon 3 , avec hybridation avec fragment génomique --donc dans les 2 colonnes à droite-- une bande sombre de 2Kb pour l' homozygote et une bande claire de 2Kb pour l' héterozygote tous les 2 correspondant à la partie réstante du fragment de 4Kb déleté partiellement ???? MERCI
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Bonjour sérano_solbarane,Je pense que vs parlez de la colonne à votre dte ,nn de celle à dte de la page,sinn j'aurais surement perdu la notion de dte et gche  !!!de tte façon je pense que j'ai compris votre question,et c tt à fait logique que vs vs la posiez!!Si l'on dit que l'on détécte un fragment de 4kb cela voudrait dire que tt le fragment a été détécté,alors qu'il y a eu délétion d'une partie de ce fragment.Imaginez qu'on ns donne le profil éléctrophorétique dû à cette délétion et qu'on y indique que le fragment de 4kb est détécté par le fragment génomique sans qu'on ns dise qu'il y a eu délétion,penseriez vs alors à la délétion???bien sur que nn puisque ce profil ne différerait plus d'un profil normal!!!
Je vs donnerais un contre exemple,la barre de moins de 2kb qu'on détécte et qui est au dessous de celle de 2kb,provient bel et bien du fragment de 4kb et pourtant on n'a pas dit que le fragment de 4kb a été détécté par l'ADNc !!
Peut être te poserais tu la question prq on ne ns a pas mis un fragment d'une autre taille détécté par l'ADN génomique comme on l'a fait pour l'ADNc .Bon là ,il faut savoir que la méthode de southern,consiste tt d'abord à faire attaquer le fragment par des enzymes de restriction avant de les dénaturer et de les hybrider ac les amorces.
Pour l'ADNc il n ' y a que les exons et dc même si l'exon 3 est délété ,la sonde pourra encore s'hybrider ac l'exon 2.Mais ds le cas d'ADN génomique où normalement l'hybridation se fait ac tt le fragment contenant aussi bien les exons que les introns ,et puisque l'exon 3 se trouve au milieu du fragment de 4kb ,qd il sera alors délété tu peux imaginer prq il n ' y aura plus d'hybridation!! Bon je pense pas que j'étais tt à fait claire ,souffrez de me l'excuser!!merci
Last edited by Rim on Thu 1 May 2008 - 19:28; edited 1 time in total
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Rim
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 11:10 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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| sérano-solbarane wrote: | merci à mademoiselle Mejbar pour ces clarifications et cette remarquable explication ; j' éspère vraiment que tu sera bien récompensé à l' examen pour cette maitrise du cours et pour ton aide à nous
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Merci infiniment!!mais malheureusement je ne maîtrise pas tt mon cours ,sauf les parties où je peux faire travailler ma tête,les autres qui concernent des notions à apprendre et qui malheureusement sont les plus posées à l'examen  je les maîtrise pas .C mon problème en fait!!je laisse tjs tomber "l7fada "qd il y a qqch qui me rappelle "lfhama"!!!et ça mlarche pas bcp en médecine  .
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kaoutar80
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 13:05 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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tberkelah 3lik a rym c magnifique
j tres b1 compris
lah y7fdek
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Rim
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| Posted: Wed 30 Apr 2008 - 13:08 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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 merci bcp Kaoutar!!!!!!!!!!wllah ça me fait plaisir que tu aies compris!!aumoins je ss arrivée à transmettre le message!!merci infiniment ma chère!!
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Rim
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| Posted: Thu 1 May 2008 - 16:58 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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Je voudrais ajouter et surtt corriger une chose que je n'ai pas bien éclaircie au début !!!Ds ts les cas ,le fragment de 2kb n'a pas été détecté par la sonde génomique car si vs remarquez bien ,il n 'y a qu'une seule sonde génomique ,c'est bien celle située au dessous du fragment et qui comporte des sites de reconnaissance des fragments 1,4 et 5kb mais elle ne comporte aucun site de reconnaissance du fragment de 2kb et c 'est bien d'ailleurs la raison pour laquelle il n'est pas détécté par la sonde génomique.Désolée si je n'étais pas assez claire !!!Et je vous remercie infiniment car c'est bien vos questions qui m'ont permis de me remettre en question et de corriger plusieures notions où j'ai du me tromper au début!!merci encore une fois
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sérano-solbarane
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| Posted: Thu 1 May 2008 - 20:04 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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MERCI beaucoup Mlle Mejbar pour ces explications, je pense que je t'ai bien comprise .
Récapitulons :
-- Délétion entraine modification entraine pèrte de complémentarité avec ADN génomique entraine hybridation impossible entraine absence du fragment dans le profil électrophorétique --
-- Par contre la détection de ce petit fragment de 2Kb ( rèste du fragment de 4Kb ) après hybridation aves ADNc est due à la présnce de ce fameux exon car comme on sait l' ADNc est un grand ami des exons et malgré la déletion , la détection du fragment n' est pas affectée car l' hybridation n' est pas concérnée puisque l' ADNc s' hybride avec chaque exon indépendemment des sites de réstriction .
En tout cas mérci
----------------------------------------------------------SIGNATURE-------------------------------------------------------------
signé
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Rim
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| Posted: Thu 1 May 2008 - 20:41 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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| sérano-solbarane wrote: | MERCI beaucoup Mlle Mejbar pour ces explications, je pense que je t'ai bien comprise .
Récapitulons :
-- Délétion entraine modification entraine pèrte de complémentarité avec ADN génomique entraine hybridation impossible entraine absence du fragment dans le profil électrophorétique --
-- Par contre la détection de ce petit fragment de 2Kb ( rèste du fragment de 4Kb ) après hybridation aves ADNc est due à la présnce de ce fameux exon car comme on sait l' ADNc est un grand ami des exons et malgré la déletion , la détection du fragment n' est pas affectée car l' hybridation n' est pas concérnée puisque l' ADNc s' hybride avec chaque exon indépendemment des sites de réstriction .
En tout cas mérci
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Oui c'est exactement ça sérano-solbarane!!!!!  Bravo!!!
| sérano-solbarane wrote: | SPECIAL MESSAGE A MLLE MEJBAR :
TON GRAND TALENT ( tbarkallah 3like ) me pousse à ésperer te voir étudiante dans une autre branche --- plus FHAMA --dans une école préstigieuse ( de HASSANIA à POLYTECHNIQUE de Paris) pas pour vider l' amphi , pas du tout , mais juste pour que tu sois dans une branche à la hauteur de tes compétences qui se manifestent très clairement à travers tes messages , en tout cas c' est un choix personel et je le réspecte parfaitement, j' ai juste voulu te faire part de mon admiration .
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Merci infiniment!!!! c'est très gentil à toi!!!!c'est vrai j'étais pas nn plus convaincue par la médecine mais j'essaie de l'accepter !!hamdoullah en tt cas!!et merci encore une fois!!
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ouazzani
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| Posted: Fri 2 May 2008 - 13:47 Post subject: biomol? |
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salam les amis ,slp si qlq un est bien comprendre l'examen de 1er session 2007 (  les questions du retard sur gel) peut nous exliquer un pt peu? et merci d'avance
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سلام الله عليكم يا اطباء المسقبل
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Rim
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Joined: 03 Sep 2007
Posts: 243
Anniversaire: 12/08/1990 Ville: fès Niveau: Deuxième année Sexe: Point(s): 547
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| Posted: Sun 4 May 2008 - 12:28 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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A ts ceux qui n'ont pas compris la technique de retardement sur gel,je vous conseille de visiter ce site!! cette méthode y est bien expliquée et vs n'aurez qu'à suivre sur vos planches (cours)!!!!Bonne chance à ts!!!
http://www.agorabcm.com/faq/faq.php?ID=116
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fir
Membre
Offline
Joined: 27 Oct 2007
Posts: 105
Anniversaire: 23/11/1988 Ville: meknes Niveau: Deuxième année Sexe: Point(s): 230
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| Posted: Mon 5 May 2008 - 14:35 Post subject: aide!!! |
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svp les ami lli 3ndou chi site zwine 3la la transgenèse
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Sophia
Rédacteur du Forum
Offline
Joined: 10 Oct 2007
Posts: 571
Anniversaire: 22/05/1989 Ville: marrakech Niveau: Deuxième année Sexe: Point(s): 1,169
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| Posted: Mon 5 May 2008 - 15:44 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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Je ne sais pas si ça peut faire l'affaire, mais voilà un site que j'avais bcp aimé!!!!!!!
http://www.biodeug.com/bm.php
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Dodiest
Modérateur
Offline
Joined: 28 Sep 2007
Posts: 479
Anniversaire: 28/09/2007 Ville: En recherche du meilleur et du pire Niveau: Deuxième année Sexe: Point(s): 967
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| Posted: Fri 25 Jul 2008 - 16:09 Post subject: Questions / Réponses (Biomol) |
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changement du titre + topic diviser + suppression du flood + lock
donc quand vous en aurez besoin merci d'envoyer un mp au moderateur de la section pour le reouvrir
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Dodiest=>modegentil desactiver
mode barbare et bourrin activer
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